Q: 自动细胞计数仪和手动计数相比有哪些优势？

自动细胞计数仪优势：1）速度快（<30 秒/样品 vs 手动 5-10 分钟）；2）结果客观，消除人为计数偏差；3）同时获得浓度、活率、平均直径等多参数；4）数据电子记录，便于追溯和统计分析；5）操作简便，培训时间短；6）重复性好（CV <5%）。适合高通量细胞实验室的常规检测。

Q: 台盼蓝染色法测细胞活率的原理？

台盼蓝（Trypan Blue）是一种大分子染料，无法穿过完整的细胞膜。死细胞膜通透性增大，台盼蓝进入细胞内呈蓝色。活细胞不着色，在显微镜下呈亮圆形。将细胞悬液与 0.4% 台盼蓝溶液 1:1 混合后 1-3 分钟内计数。染色时间过长（>5 分钟）会导致活细胞也染色，造成活率偏低。

Question 1

同步热分析仪（STA）相比单独 TGA 的优势？

Accepted Answer

STA（TGA-DSC/DTA 同步）的优势：1）同一样品同时获得质量变化和热效应信息；2）可区分伴随质量变化（分解、氧化）和不伴随质量变化（相变、玻璃化转变）的热事件；3）节省样品用量和实验时间；4）消除了不同实验间的样品差异。例如：碳酸钙分解时 TGA 显示失重，DTA 同时显示吸热峰。

Question 2

导热系数测定仪有哪几种测量方法？

Accepted Answer

主要测量方法：1）热流法（稳态法）：适用于中低导热材料（0.01-10 W/mK），按 ASTM E1530 操作；2）热线法/热带法（瞬态法）：适用范围宽（0.02-500 W/mK），按 ISO 22007-2 操作；3）闪光法（LFA）：适用于高导热材料和薄膜，按 ASTM E1461 操作；4）保护热板法：适用于隔热材料，按 GB/T 10294 操作。

Question 3

DSC 坩埚材质如何选择？

Accepted Answer

铝坩埚最常用（-150~600°C），成本低。氧化铝坩埚适合高温（~1600°C）。铂金坩埚化学稳定性最好（~1750°C），但价格昂贵。样品如果与铝反应（如含氟化物或强碱），必须使用铂或氧化铝坩埚。密封坩埚适合含挥发性成分的样品。高压坩埚（不锈钢）用于 >1 MPa 内压情况。

Question 4

TGA 实验中保护气和吹扫气的作用？

Accepted Answer

保护气流经天平室，保护天平机构不受腐蚀性分解气体的侵蚀，通常使用惰性气体（N₂ 或 Ar）。吹扫气流经样品室，控制样品周围的气氛环境（氧化/惰性/还原）。两路气体需独立控制流量。典型设置：保护气 20 mL/min，吹扫气 50 mL/min。切换气氛时需等待充分置换。

Question 5

差热分析中基线漂移如何处理？

Accepted Answer

基线漂移的处理：1）确保空坩埚校正（运行空白实验并扣除）；2）参比物质量与样品接近以减少热容差异；3）检查热电偶接触是否良好；4）升温速率适中（过快加剧漂移）；5）数据处理时使用软件的基线校正功能（切线法或 S 型基线）。严重漂移可能指示仪器需要维护或传感器更换。

Question 6

热分析实验对样品量有什么要求？

Accepted Answer

TGA：通常 5-20 mg，对于密度差异大的样品通过体积填充度判断。DSC：聚合物 5-10 mg，金属 20-50 mg。DTA：20-100 mg。样品量过多会导致温度梯度大、分解产物排出慢；过少则信号弱、代表性差。粉末样品应松散平铺在坩埚底部，不宜压实。

Question 7

流式细胞仪的光路校准多久做一次？

Accepted Answer

建议每次开机后使用标准微球进行光路校准。全面校准（激光功率、PMT 电压、补偿矩阵）每周至少一次或更换光学组件后。校准微球需保存在 2-8°C 避光环境，使用前充分混匀。校准指标包括 CV 值（通常要求 <3%）、灵敏度（分辨暗淡和明亮荧光的能力）和线性范围。

Question 8

自动细胞计数仪和手动计数相比有哪些优势？

Accepted Answer

自动细胞计数仪优势：1）速度快（<30 秒/样品 vs 手动 5-10 分钟）；2）结果客观，消除人为计数偏差；3）同时获得浓度、活率、平均直径等多参数；4）数据电子记录，便于追溯和统计分析；5）操作简便，培训时间短；6）重复性好（CV <5%）。适合高通量细胞实验室的常规检测。

Question 9

台盼蓝染色法测细胞活率的原理？

Accepted Answer

台盼蓝（Trypan Blue）是一种大分子染料，无法穿过完整的细胞膜。死细胞膜通透性增大，台盼蓝进入细胞内呈蓝色。活细胞不着色，在显微镜下呈亮圆形。将细胞悬液与 0.4% 台盼蓝溶液 1:1 混合后 1-3 分钟内计数。染色时间过长（>5 分钟）会导致活细胞也染色，造成活率偏低。

Question 10

生物安全柜 II 级 A2 型和 B2 型有什么区别？

Accepted Answer

II-A2 型：前窗进风速度 ≥0.5 m/s，70% 循环空气+30% 排出经 HEPA 过滤后排入室内或通过套管排出。II-B2 型：100% 排出，不循环，需硬管连接建筑排风系统。B2 型适合使用挥发性有毒化学品和放射性核素的操作，但能耗高、对排风系统要求严格。日常微生物操作 A2 型即可满足需求。

Question 11

生物安全柜的 HEPA 过滤器多久更换一次？

Accepted Answer

HEPA 过滤器正常使用寿命为 3-5 年，具体取决于使用强度和环境洁净度。更换指标：1）风速下降无法通过调节风机补偿时；2）年度检测时过滤效率低于 99.99%（0.3 μm 颗粒）；3）泄漏检测不合格。更换后需由专业人员进行 PAO 或 DOP 泄漏检测验证。拆卸旧过滤器需按生物安全规程消毒处理。

Question 12

超净工作台和生物安全柜可以互相替代吗？

Accepted Answer

不可以。超净工作台（洁净台）仅保护样品不受空气中颗粒物污染，气流吹向操作者方向，不保护操作者。生物安全柜同时保护操作者、样品和环境（通过负压和 HEPA 过滤排气）。涉及病原微生物、人源细胞等有生物危害的操作必须在生物安全柜中进行，绝对不能使用超净工作台。

常见问题